目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的新生儿脐带血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞增殖活性。方法:新生儿脐带血单个核细胞经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记后,加入TGF-β1,同时用CD3mAb激活和IL-2培养扩增。培养第4、6、8天收集细胞,用流式细胞术检测活化增殖后的CD4⁺CD25⁺、CD8⁺ T细胞增殖动力学变化。结果:培养后第6、8天,实验组CD4⁺CD25⁺ T细胞增殖指数分别为11.52、23.04,高于对照组CD4⁺CD25⁺ T细胞(6.68,10.46)及实验组CD8⁺ T细胞(4.23,5.43)。培养后第8天,实验组CD4⁺CD25⁺ T细胞第8代到第10代所占的比例为52.74%,在各代中以第8代所占比例最高,而对照组CD4⁺CD25⁺ T细胞第8代到第10代所占的比例为36.26%;实验组CD8⁺ T细胞第8代到第10代所占的比例为13.54%,在各代中所占比例最高的为第2代,而对照组CD8⁺ T细胞第8代到第10代所占的比例为29.44%。结论:TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞增殖活性明显强于CD8⁺ T细胞。

目的:观察SYBR Green相对定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)方法检测急性髓系白血病(AML)患者外周血单个核细胞(PBMC)中脑和急性白血病细胞胞质(BAALC)基因mRNA的表达水平。方法:分离12例初发AML患者和5名健康成年人PBMC,以白血病细胞株K562为阳性对照,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,SYBR Green相对定量RQ-PCR检测BAALC基因表达水平。结果:健康成年人PBMC中检测不到BAALC mRNA的表达,12例AML患者中,有8例BAALC mRNA高表达,与K562比较,其相对值为K562的0.8~5.6倍。结论:用SYBR Green相对定量RQ-PCR可以检测到AML患者PBMC中BAALC基因的表达,该方法稳定、敏感、可靠。

目的优化金银花的提取工艺，建立高效液相色谱法（HPLC）快捷检测绿原酸和异绿原酸A的方法。方法以HPLC同时测定绿原酸、异绿原酸A的含量为指标，通过比较醇浓度、回流时间、超声功率、超声时间4因素对提取工艺的影响，优化超声波辅助醇法提取金银花的工艺。结果以绿原酸、异绿原酸A的综合评分为指标，最佳提取工艺是60%乙醇超声（功率500 W）45 min，再回流提取1 h。结论建立了准确灵敏的检测方法，优化的提取工艺经济、高效，能为生产提供理论依据。